产品简介

品牌 货号 规格 供货周期 主要用途 应用领域

自营品牌	AN19L122/AN19L123
1 mL	现货
用于实时定量PCR（qPCR）的DNA 结合染料	生物产业

LcGreen（20×水溶液）是一种用于实时定量PCR（qPCR）的DNA 结合染料，LcGreen对PCR的抑制性远小于SYBR Green I，稳定性*，降低了细胞膜透性，比SYBR Green 1更加安全。

详细介绍

产品描述　　LcGreen （20×水溶液）是一种用于实时定量PCR（qPCR）的DNA 结合染料。本产品的诸多优点使它远胜于SYBR Green I，除了有相似的光谱特性，还有三个主要特点使它区别于SYBR Green I 。　　首先，LcGreen对PCR的抑制性远小于SYBR Green I。因此，使用LcGreen进行的qPCR实验可以使用快速PCR步骤。同时，本产品在实验中可以使用较高的浓度，从而获得远强于SYBR Green I扩增信号。较高浓度也消除了“染料重分布"的缺陷，使本产品既可用于多重PCR，也可用于高分辨率（高清晰）熔解曲线分析（HRM）。该分析正被越来越多的用于PCR后的基因分型和异源双链分析。由于SYBR Green I对PCR的抑制性，从而要求其使用浓度必须很低，因此SYBR Green I无法解决由低浓度造成的染料重分布问题，既不能用于多重PCR也不能用于HRM。同时，染料重分布问题也可能影响常规熔解曲线的可靠性，因为低熔点的DNA链可能由于这种原因而无法检测到。     　　第二，本产品的稳定性*。在正常的储存、操作和PCR过程中不会被破坏。在缓冲溶液中的染料可以安全的储存在室温或冰箱里，也可以反复冻融。与之相反，SYBR Green I不稳定而且降解后对PCR抑制性更强。　　第三，本产品降低了细胞膜透性，因而比SYBR Green 1更加安全。独立实验室的测试结果显示，本产品既没有诱变性也没有细胞毒性。相反，虽然SYBR Green I本身诱变性很弱，但它在细胞中可能抑制了正常DNA的修复机制，使其有诱变增强作用。考虑到PCR的广泛使用，其安全性应该足够重视。订购信息

产品名称	货号	规格	价格
LcGreen（20×水溶液）	AN19L122	1 mL	700
LcGreen（20×水溶液）	AN19L123	5 mL	2800

产品参数　　λabs/λem = 500/530 nm (结合DNA)　　λabs = 471 nm (未结合DNA)运输与保存　　蓝冰运输。-20℃避光保存，有效期60个月。【注】：短期使用请避光保存于4℃。

使用方法如下建立实验体系：（仅供参考）

名称	体积
10×的无Mg2＋聚合酶缓冲液	5 µL
50 mM MgCl2	2.5 µL
2 mM dNTP	5 µL
20×LcGreen	2.5 µL
Taq DNA polymerase	1-5 units
F, R Primers	各0.1-0.5 µM
模板	适量
dH2O	to a final volume of 50 µL

实验目的　　实时定量PCR检测20× LcGreen主要试剂（1）Primehβ-actin：forward 5’ -CACCCACACTGTGCCCATCTACGA-3’ reverse 5’-CAGCGGAACCGCTCATTGCCAATGG-3’（2）HS Taq DNA Polymerase: Thermo(EP0612)（3）Glycerlo: Sigma(V900090-500 mL)（4）BSA: Sigma(A7030)（5）10 mM dNTPs: Takara(4019)实验方案1. 配制2× LcGreen Buffer

2× LcGreen Buffer
组分	浓度	体积（μL）
1 M Tris HCl pH8.5	50 mM	5
500 mM (NH4)2SO4	20 mM	4
50 mM MgCl2	7 mM	14
50% glycerol	2.5%	5
DMSO	10 %	10
20× LcGreen	2×	10
10 mM dNTPs	0.4 mM	4
2 % Tween20	0.03 %	1.5
1 mg/mL BSA	22 mg/mL	2.2
H2O	/	44.3
Total volume	/	100

2. 配制 q-PCR反应体系

成分	20 μL/体系/管反应
10 μM primers	1 μL
模板	适量
HS Taq DNA 酶 （5 U/μL）	0.2 μL
2× LcGreen buffer	10 μL
H2O	定容至20 μL

【注】：① DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下，因不同种类的 DNA模板中含有的靶基因的拷贝数不同，必要时可进行梯度稀释，确定合适的 DNA 模板添加量。cDNA作为模板时的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的 10%。② 引物终浓度一般控制在0.1-0.5 μM范围内。3. 实验分组：标准对照样品孔（阳性对照）、检测样品孔、空白对照孔（阴性对照）共三组，同时进行检测，分别进行三次平行实验。4. 混匀离心、上机进行荧光定量PCR（仪器为Roche：LC96）。PCR程序：

	温度	时间
Step 1	95 ℃	2 min
Step 2	95 ℃	5 sec
Step 3	60 ℃	30 sec
Step 2~3，重复 45个循环
熔解曲线Tm值 57 ℃~99 ℃

5.保存数据，判断样本质量：（1）检测样品与标准品之间的Ct值差（2）检测样品与标准品之间的荧光强度差检测结果需达到：以上两组检测指标无显著性差异注意事项该产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。相关试剂推荐LyGreen (20×in water) HRM用染料（20×水溶液）（货号：AN19L022）